雞胚血液原始生殖細胞的分離純化及鑒定

家禽的原始生殖細胞（primordial germ cells,PGCs）是形成精子和卵子的前體細胞,可在性成熟的家禽體內生成精子和卵子,因此家禽PGCs可應用于以PGCs為基礎的現代保種技術、轉基因技術以及家禽的發育生物學等研究領域,具有重要的科研與應用價值.

本研究使用Nycodenz密度梯度離心法在孵化至13～15期的雞（Gallus gallus）胚血液中分離純化雞胚的PGCs,經顯微注射針分揀后,PGCs的純度可達99％以上,細胞直徑主要集中于13～15 μm;將所分離純化的PGCs分別通過堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）染色、高碘酸希夫氏（periodic acid-schiff,PAS）染色及階段特異性胚胎表面抗原-1 （stagespecific embryonic antigens-1,SSEA-1）免疫化學染色進行鑒定,染色結果均出現PGCs所特有的反應。

使用活細胞熒光染料PKH26對分離純化的PGCs進行標記,成功標記的PGCs在熒光顯微鏡下可觀測到紅色熒光,將約200個標記后的PGCs,通過腹主動脈注入孵化至14～16期的受體雞胚中,在孵化至第8天的雞胚性腺冷凍切片中,可檢測到供體PGCs的存在,這一結果表明,所分離純化的PGCs可定植于受體雞胚的性腺中.本研究為以PGCs為基礎的種質資源保存研究以及轉基因技術研究提供了基礎資料.

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