豬支原體肺炎滅活疫苗

來源：  發布日期：2011-09-12  發布者：曉天  共閱1692次

本品系用豬肺炎支原體P-5722-3株（NL1042株）接種適宜培養基培養，收獲培養物，經BEI滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成。用于預防豬支原體肺炎。

[處方]

[制法]

[性狀]乳白色乳劑。

[鑒別]

[檢查]

[含量測定]

[功能與主治]/[作用與用途]

[用法與用量]/[用法與判定]

[注意事項]

[規格]（1）50頭份（100ml）/瓶 （2）250頭份（500ml）/瓶 （3）500頭份（1000ml）/瓶

[貯藏]2～8℃保存，有效期為24個月。

[制劑]

附注：豬支原體肺炎滅活疫苗效力檢驗方法采用固相ELISA法測定疫苗中所含抗原的相對效力單位。 1 材料 1.1 設備 1.1.1 96孔微量反應板 1.1.2 酶聯讀數儀 1.1.3 超聲波裂解器 1.1.4 離心機 1.1.5 14×89mm離心管 1.1.6 25×89mm離心管 1.1.7 加樣器及配套吸頭 1.1.8 酶聯洗板機 1.1.9 溫箱 1.1.10 pH計 1.1.11 混合器 1.1.12 試劑貯存管 1.1.13 微量板震蕩器 1.1.14 RELPOT軟件包（3.1或更新版本） 1.1.15 吸水紙 1.2 緩沖液 1.2.1 0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）氯化鈉 8.0g 氯化鉀 0.2g 磷酸二氫鉀0.2g 磷酸氫二鈉 1.15g 純水 加至1 L 將各種鹽按比例溶解于水中，調至pH 7.2 0.1。在室溫下保存，如不打開，可使用6個月，打開后，可使用3個月。 1.2.2 PBS-吐溫20 （PBST） 取0.5ml吐溫20，加到1L PBS中。在室溫下保存，如不打開，可使用6個月，打開后，可使用3個月。 1.2.3 1% PVA/PBS 取10g聚乙烯醇（PVA，88%水解物），加到1L PBS中，稍加熱，使其溶解。濾過。在室溫下保存，可使用3個月。 1.3 試劑 1.3.1 豬肺炎支原體單克隆抗體 Norden雜交瘤1-2'腹水單抗。在-10～-25℃下保存。經Western Blot試驗證實，該單抗識別豬肺炎支原體上的 40kD蛋白質。 1.3.2 參考疫苗 1.3.3 陰性對照品 含5% Amphigen的生理鹽水乳劑。在-65℃下保存。 1.3.4 陽性對照品 1.3.5 酶結合物 通過親和層析方法純化的羊抗鼠IgG（H+L）過氧化物酶結合物，每瓶1.0mg。凍干的酶結合物在2～8℃下保存，使用時，用1% PVA/PBS稀釋至終濃度為0.5mg/ml。稀釋后的酶結合物在-10～-25℃下可保存1年。 1.3.6 底物 ABTS。 2 待檢疫苗、參考疫苗、陽性對照品、陰性對照品的處理 2.1 將各種樣品（待檢疫苗、參考疫苗、陽性對照品和陰性對照品） 至少14ml在 65℃以下冷凍至少24小時。 2.2 將待檢疫苗、參考疫苗、陽性對照品和陰性對照品在37 2℃下融化20分鐘。 2.3 將上述樣品分別分成2等份（各7ml），分別加入離心管中，超聲處理55～65秒 （脈沖，50%功率循環，輸出功率=4），并用循環水進行冷卻。 2.4 將上述每種超聲處理過的樣品混合，分別倒入超速離心管中（每種樣品約12.0～12.5ml），在2～8℃下以30000r/min離心 6小時。 2.5 離心后，小心棄去油層和上清液，用Kimwipe對離心管進行干燥，直到除去離心管內壁上殘留的油層。分別將待檢疫苗、參考疫苗、陽性對照品和陰性對照品的離心沉淀物溶解在1.2ml PBS中，用封口膜封口，置2～8℃過夜。 2.6 次日，通過振動和反復吹吸使豬肺炎支原體細胞沉淀物充分溶解。 3 抗原包被 3.1 抗原稀釋 3.1.1 參考疫苗抗原 進行2倍系列稀釋，直至1:128。 3.1.2 待檢疫苗抗原和陽性對照品 稀釋到參考疫苗工作曲線范圍內。 3.1.3 陰性對照品 稀釋至1:16（取62.5ul陰性對照品樣品加到937.5ul PBS中）。 3.1.4 空白對照 PBS。 3.2 包被 取一96孔板，每份抗原一式3孔，每孔加100ul。加蓋，置37 2℃ 60～65分鐘。用PBS手動洗滌一次。 4 封閉 每孔中各加入1% PVA/PBS 250ul，加蓋，置37 2℃ 30～35分鐘，倒去液體，拍干。 5 加入指示抗體 用1% PVA/PBS將腹水單抗稀釋成1:1000，每孔加100ul，加蓋，置37 2℃ 60～65分鐘。用PBST洗板3次。 6 加入酶標抗體 用1% PVA/PBS將羊抗鼠IgG（H+L）過氧化物酶結合物稀釋成1:4500，每孔加入剛稀釋好的酶標抗體溶液100ul，加蓋，置37 2℃ 60～65分鐘。用PBST洗板3次。 7 加入底物 每孔中加入新制備的ABTS 100ul，加蓋，置室溫下30分鐘。振蕩反應板后，在酶聯讀數儀上讀取波長405nm下的OD值。 8 數據處理 用RELPOT軟件包（3.1或更新版本）進行數據處理。 8.1 將"最小OD值"設置為0.05，將"最小斜度"設置為0.15，將超出這些范圍的數據自動剔除。 8.2 將每孔OD值減去空白孔OD值的平均值。 8.3 輸入參考疫苗校正后的OD值和稀釋度。 8.4 輸入陽性對照品和待檢疫苗校正后的OD值和稀釋度。 8.5 將輸入的數據進行處理，并打印結果。 8.6 根據打印結果中的最高數值選擇陽性對照品和待檢疫苗的最高RP值。 9 結果判定 每批疫苗出廠時的RP值應不低于6.33，在整個有效期內的RP值應不低于5.06。 9.1 "無結果"是指：缺乏有效的參考疫苗或其他樣品的線（在有效的參考疫苗或樣品線中，每個參考疫苗應至少有3個點，每個陽性對照品或待檢疫苗應至少有3個點）；陰性對照品的OD 值大于參考疫苗的最小OD值；根據有效的平行線得到的對照樣品的效力，超出了2個標準差范圍。如發生上述情況，可以重檢至多2次。如在某批產品的檢驗過程中，由于相同原因出現3次"無結果"，則應停止對該批疫苗的檢驗，直到查清原因并使問題得到解決為止。在問題得到解決后，可對該批產品進行重檢。 9.2 "結果可疑"是指：可以獲得有效的參考疫苗線和待檢疫苗線，但二者不平行。由于不能確定產品的效力是否合格，因此該批產品不能出廠。如果第1次檢驗結果為"結果可疑"，可以重檢3次。根據表1中的重檢情況確定產品的效力檢驗結果。若不重檢，則判該批疫苗不合格。 9.3 "不合格"是指：在第1次檢驗中產生了有效的平行線，但疫苗效力低于最低標準。至少應進行2次重檢，但不超過3次。根據表2中的重檢情況確定產品的效力檢驗結果。若不重檢，則判該批疫苗不合格。

《進口獸藥質量標準》

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