磺胺喹噁啉酶聯免疫試劑盒質量標準

來源：  發布日期：2011-09-03  發布者：曉天  共閱1736次

本品系用磺胺喹噁啉（SQX）偶聯蛋白的抗原、磺胺喹噁啉單克隆抗體和酶標記羊抗鼠及其它試劑制成。用于定量、定性檢測豬組織、雞組織、血清、尿液中磺胺喹噁啉的殘留量。

【物理性狀】試劑盒外觀完整，內裝試劑齊全。包被抗原的酶聯板透明、干燥且用真空包裝，磺胺喹噁啉抗體工作液、底物液、終止液、標準品、濃縮洗滌液、濃縮提取液為透明溶液，酶標記物為淺黃色溶液。試劑無菌檢驗均應合格。

【靈敏度測定】 取已包被好的酶標板12孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L標準溶液各20?L，加入酶標二抗工作液50?L，再加入 SQX抗體工作液80?L，20~25℃反應1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液(A液、B液)各50?L，避光20~25℃反應30min，用50?L終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（0標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以SQX濃度（?g/L）的自然對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。

IC50 （即0濃度標準溶液的吸光度值50％處所對應的SQX濃度）范圍應在1.67?g/L ~3.29?g/L之間。

【特異性測定】 取已包被好的酶標板18孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L標準溶液和陰性豬肉樣本提取液、25?g/kg和50?g/kg添加的陽性豬肉樣本提取液各20?L，加入酶標二抗50?L，再加入SQX抗體工作液80?L，20~25℃反應1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50?L，避光20~25℃反應30min，用50?L終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（0標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以SQX濃度（?g/L）的自然對數為X軸，百分吸光度為Y軸，繪制標準曲線圖。從標準曲線中查出陰性豬肉樣品和25?g/kg和 50?g/kg SQX添加的組織樣品的測定濃度。

陰性豬肉樣品測定值在5?g/kg以下，25?g/kg和50?g/kg SQX添加濃度回收率應在60.0％~110.0％之間。

【精密度測定】 取已包被好的酶標板32孔，每兩孔分別加入0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、81?g/L標準溶液20?L，其它20孔加入9?g/L的標準溶液20?L，加入酶標二抗50?L，再加入SQX抗體工作液80?L，20~25℃反應1h，取出洗板5次，拍干。加入底物液（A液、B液）各50?L，避光20~25℃反應30min，用50?L終止液終止反應，置450nm波長處測定吸光度值。

20個微孔的9?g/L標準溶液的吸光度值變異系數（%）應≤25%（n=20）。

【適用范圍】用于定量、定性檢測豬或雞組織（肌肉、肝臟）、血清、尿液中磺胺喹噁啉的殘留量。

【用法和結果判定】

1. 溶液配制

1.1 2M 氯化鈉溶液：稱取11.69gNaCl　 加入100ml水溶解。

1.2 0.02 M PB緩沖液：Na2HPO4·12H2O 2.58g

　　　　　　　　　　 Na2HPO4·2H2O　 0.44g

加入500ml水溶解。

1.3 稀釋提取液：將20X濃縮提取液搖勻，用水以1：20比例稀釋，臨用前配制。

1.4 稀釋洗滌液：將20X濃縮洗滌液搖勻，用水以1：20比例稀釋，臨用前配制。

2. 樣本前處理

2.1　 豬或雞組織（肌肉、肝臟等）樣本處理方法

2.1.1 取適量組織用勻漿機10000r/min勻漿1 min，稱?。?±0.1）g勻漿物置離心管中，加入9mL乙腈-水溶液（84+16，v/v）混合，劇烈振蕩10min。于15℃， 3000g以上速度離心10min；

2.1.2 取4mL上清液，加入2M氯化鈉溶液2mL和7mL乙酸乙酯，混合振蕩10min，15℃3000g以上速度離心5min；

2.1.3 將上層液移到離心管中用氮氣吹干；（或雞心瓶中，50℃減壓蒸干）

2.1.4 加入正己烷1mL振蕩1min，再用稀釋了的提取液1mL混合2min。15℃，3000g，離心5min，除去上層液；

2.1.5　 取20mL下層相進行分析。

2.2 血清樣本處理方法

2.2.1 將加有抗凝血劑的血樣本，于10℃，3000g以上離心10min。分離出血清或過濾血清；

2.2.2 取1mL血清，加入3mL 稀釋了的提取液，混合后，取20mL進行分析。

2.3 尿液樣本處理方法

2.3.1 將尿樣本于10℃，3000g以上離心10 min。

2.3.2 取1 mL澄清的尿樣，加入3 mL稀釋了的提取液，混合。

2.3.3 取20μL進行分析。

3. 檢測步驟

3.1將試劑盒從4℃冷藏環境中取出并將所需試劑從盒中取出，置于室溫（20~24℃）平衡30 min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

3.2 取出需要數量的酶標板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2~8℃，不要冷凍。

3.3 編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品均需做2

孔。

3.4 反應：往酶標板微孔中加標準溶液或試樣溶液20 ?L，加入酶標記物50 ?L，再加入SQX單克隆抗體80?L，用蓋板膜封板，20~25℃恒溫箱中反應1h。倒出孔中液體，將酶標板倒置在吸水紙上拍打，去除孔中液體。每孔加入250?L洗滌液，15秒后倒出孔中液體，用吸水紙拍干，如此重復操作共洗板5次。

3.5 顯色：每孔加入A、B底物液各50?L，輕輕振蕩混勻，20~25℃恒溫箱避光顯色30min。

3.6 測定：每孔加入終止液50?L，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定每孔吸光度值（OD值）。

4. 結果判定

所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值(B0)再乘以100%，即百分吸光度值。

百分吸光度值（%）＝
B
×100%

B0



以SQX濃度的自然對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。相對應每一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。也可以用回歸方程法，計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟件，更便于大量樣品的快速分析。

【貯藏條件和保存期】試劑盒應在2~8℃保存，保存期為六個月。

【規格】 每個試劑盒含96孔板一塊；SQX標準品6瓶，1mL/瓶（0?g/L、1?g/L、3?g/L、9?g/L、27?g/L、 81?g/L）；SQX抗體工作液1瓶，10mL；酶標二抗工作液1瓶，7mL； 20倍濃縮洗滌液1瓶，40mL； 20倍濃縮提取液1瓶，50mL；底物液A液1瓶，7mL；B液1瓶，7mL；終止液1瓶，7mL；高濃度標準品（1?g/ mL）1瓶，1mL；蓋板膜一張；自封袋1個；說明書1份；質量報告1份。

【注意事項】

1、試劑盒在緩沖液配制和液體分裝上要做到無菌，防止試劑變質。

2、試劑盒標準品應經過嚴格配制后方可用于試劑盒中。

3、添加回收用的高濃度標準品需經過試劑盒自身標準驗證，合格后方可用于特異性和準確度監控用。

4、格按照質量標準所述用法和結果判定內容進行試劑盒質量控制。

5、在試劑盒老化實驗中出現有不合格現象，則視該批試劑盒為不合格。

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